——打造蛋白質研究整體解決方案自從1990年科學家啟動了人類基因組測序項目，并于2003年4月14日完成了這項工作，至此，人類跨入了蛋白質時代。我們都知道，蛋白質廣泛存在于生物界，蛋白質作為生命活動的物質承擔著、生理功能的執行者和生命現象的直接體現者，研究蛋白質對闡明生命體的變化機制具有重要作用?；诖隧椦芯康闹匾饬x，我們永聯生物自成立以來，始終致力于為客戶提供從培養到分離純化的多維度全方位整體蛋白質研究解決方案。1.蛋白質表達許多天然蛋白質的含量非常少，為了獲得大量的目的蛋白，我們可以通過基因工程的技術，將編碼目的蛋白的核酸序列導入到宿主細胞中，使其過量表達。目前常用的表達系統有原核生物表達系統，如大腸桿菌表達系統，真核生物表達系統，如哺乳動物表達系統（HEK293細胞/CHO細胞等），昆蟲細胞（SH9/SF21/HIGH-FIVE）表達系統等，每一種表達系統都有其獨特之處，在不同的研究領域均有其重要的席位。原核表達系統，大腸桿菌結構簡單，遺傳背景清楚，基因調控機制明確，是表達外源基因的合適宿主，且培養簡單，成本低，便于大規模生產，但是大腸桿菌表達的外源蛋白缺乏轉錄后加工、翻譯后修飾能力、同真核細胞表達的蛋白質存在差異。因此越來越多的科學工作者都開始使用真核細胞表達系統進行科學研究，同原核細胞表達系統相比，哺乳動物細胞（常用HEK293細胞/CHO細胞）克服了翻譯后修飾蛋白表達的問題，更接近于天然蛋白質。真核表達系統，以哺乳動物細胞為例，HEK293細胞容易轉染，是一個很常用的表達研究外源基因的細胞株，因此廣泛應用于蛋白質科研。到目前為止，HEK 293細胞已在細胞研究中廣泛應用多年。真核表達系統還有一大分類，是昆蟲細胞（SF9/SF21/High-Five）表達系統。桿狀病毒表達系統是目前應用＊廣的昆蟲細胞表達系統，該系統具有高水平表達重組蛋白的潛能，操作流程簡單，具有真核蛋白的加工能力, 包括對蛋白質進行磷酸化或糖基化等的修飾能力，目前多用于表達多種病毒蛋白、激酶蛋白等。 Union293細胞培養基是一種專門開發應用于支持懸浮培養中HEK293（人腎上皮細胞系）相關細胞（如Expi293、293F、293FT、293A/S等）的生長和轉染表達、該培養基為即用型完全培養基，含有L-Glu，無需補充添加劑。 Union昆蟲細胞培養基是一種廣泛用于草地貪夜蛾細胞SF9和SF21以及親本粉紋夜蛾（粉紋夜蛾卵巢）細胞系High-Five的貼壁和懸浮生長。培養基為即用型完全培養基，含有L-Glu無需補充添加劑。無論是原核表達系統，還是真核表達系統，想要得到過量表達的目的蛋白，第一步我們都要將我們的工具，也就是大腸桿菌，哺乳動物細胞，或者昆蟲細胞進行培養增值。不同的細胞其生長環境也不一致。轉染常規轉染技術分為兩大類，即瞬時轉染和穩定轉染。注意，轉染時的細胞需處于對數生長期，活率＞95%。瞬時轉染將外源DNA通常是質粒DNA以化學或者物理的方式導入到細胞中，導入的核酸沒有整合到宿主細胞基因組，只會短暫地存在于宿主細胞中，不會隨著細胞的分裂而進入到子代細胞中。而穩定轉染則是將外源DNA整合到細胞基因組中或作為附加體質粒保留在細胞中。因懸浮細胞轉染后通常不能換液，則在實際操作過程中，我們需要對培養物添加細胞補料，為細胞后期生長提供營養。如293細胞補液，CHO細胞補液。感染病毒感染是我們在實際工作中，另外一種外源基因過量表達的方式。注意，感染時的細胞需處于對數生長期，活率＞95%。HEK 293細胞常被用于腺病毒載體的構建和表達，SF9/SF21/High-Five細胞常用于桿狀病毒構建與表達，將構建好的病毒，在經過病毒獲取，純化，及滴度測定后，加入到已經增值好，且處于對數增長期的細胞中，進行培養。此外，選擇一種良好的培養瓶，對于細胞培養同樣重要，永聯生物為客戶提供兩大類細胞培養瓶，分別是塑料培養瓶和玻璃培養瓶，玻璃培養瓶因內部具有氧化鍍膜，且其設計造型獨特，大口，大底，為細胞的生長提供了更加柔性的生長環境。射線滅菌，獨立無菌包裝無菌、無毒性、無熱原0.2um透氣膜，防污染，透氣良好低剪切、低吸附在經過擴大化培養后，我們就可以獲得足夠量的細胞，此時，我們通常使用轉染或者感染的方式，將外源的DNA進行過量表達?；诖?，永聯生物針對每一種細胞的增值條件均有不用的疊加式恒溫振蕩器提供給客戶進行選擇。如大腸桿菌的培養可用UL1L12或者UL3L12昆蟲細胞和哺乳動物的培養則可以使用UL1L12C或者UL3L12C（根據用戶培養量的不同進行選擇）。UL1L12C和UL3L12C型振蕩器采用的原裝進口CO2紅外傳感器，保證CO2濃度的穩定性，進一步保證細胞生長環境的穩定。UL1L12C更是采用了磁力驅動機芯，擁有極優的運行穩定性。 UL3L12/UL3L12C UL1L12 UL1L12C一臺優秀的恒溫振蕩器，對于溫度的均一性和污染的抑制性是有嚴格要求的。 ü 進口變頻壓縮機，保證內腔內溫度均一性控制在±0.3 ℃ ü 雙向紫外殺菌，讓污染無處遁形；多組高效過濾器設計，減少污染進入； 內弧角、突出導軌的設計，讓污染無處藏身 ü 多重貼心設計讓實驗成功率大大提升，減少人力和物力的浪費2.蛋白質獲取經過一段時間的培養后，細胞外源DNA此時已經進行了過量的表達，若目標蛋白是分泌型蛋白質，則可以直接將培養物離心，對上清液進行鑒定，純化，如果是胞內表達的蛋白質，則需對細胞進行破碎，使蛋白質釋放。目前常用的方法有使用高壓細胞破碎、超聲波細胞破碎等物理方式，也有使用裂解液的化學方式。永聯生物為客戶提供了多種型號高壓細胞破碎機，應對客戶不同的處理量，有不同型號的儀器供客戶選擇。其獨特的喇叭口式破碎閥結構可以在同等壓力下大大提高生物均質細菌效果。進而提高蛋白質的獲得率。此外，永聯生物的高壓細胞破碎機，均為客戶配備了冷卻水循環機，降低物料在破碎過程中產生的溫度，盡可能避免蛋白質在破碎過程中因高溫導致的不可逆失活。同高壓細胞破碎儀相比，超聲波細胞破碎機瞬間釋放的能量過高，容易導致蛋白質的高溫變性失活，而使用裂解液破碎細胞則破碎的產物中不可避免的會有化學物質的污染。3.蛋白質純化經過了高壓細胞破碎儀的處理，蛋白質從細胞中得到釋放，經過離心的處理，我們取其上清。此時上清液中的蛋白質是一種混合形式的存在，想要得到某種蛋白質的單獨的溶液，我們還需對上清液進行純化。所謂蛋白質純化即利用不同蛋白間內在的相似性與差異，利用各種蛋白間的相似性來除去非蛋白物質的污染，而利用各蛋白質的差異將目的蛋白從其他蛋白中純化出來。每種蛋白間的大小、形狀、電荷、疏水性、溶解度和生物學活性都會有差異，利用這些差異可將蛋白從混合物中提取出來得到目的重組蛋白。根據不同的分離原理，蛋白質的分離方法有以下種類根據蛋白質溶解度不同的分離，如鹽析法、等電點沉淀法等，根據蛋白質分子大小的差別的分離，如透析、超濾、凝膠過濾法、超速離心等，根據蛋白質帶電性質進行分離，如電泳法，離子交換層析法等，根據配體特異性的分離，如親和層析法。目前常用鹽析法、等電點沉淀法等對蛋白質進行粗提，利用層析等方法對蛋白質進行進一步分離純化。其中尤以層析的方法使用＊廣。隨著生命科學儀器領域的不斷發展，蛋白純化儀越來越受到科研及生產用戶的歡迎，因其具有自動化程度高，穩定性優于人工操作，越來越多的客戶開始選擇使用蛋白純化儀替代手工純化。永聯生物為客戶提供了單波長，雙波長，四波長三個系列的蛋白純化儀，每個系列均有流速0.001-25.000ml/min，0.001-100.000ml/min，0.01-150.00ml/min，0.01-300.00ml/min四種流速的機器供客戶選擇。目前永聯生物生產的蛋白純化儀因其優良的品質，受到了全國重點高?？蛻舻囊恢潞迷u，用戶＊在意的光源的壽命，目前采用的氘鎢燈組壽命至少可以做到2000小時。且自主開發的中/英雙語言操作的工作軟件，符合CFDA相關要求，終身免費升級。 凝膠柱層析：根據分子大小分離蛋白質混合物，因凝膠具有網狀結構，小分子物質能進入其內部，而大分子物質卻被排除在外部。當一混合溶液通過凝膠過濾層析柱時，溶液中的物質就按不同分子量篩分開了。永聯生物為客戶提供 UNIONDEX 系列介質UNIONDEX 75 PG，UNIONDEX 200 PG）及UNIONDEX 系列凝膠過濾預裝柱，UNIONDEX 系列凝膠過濾預裝柱是即用型凝膠過濾層析柱，省去了自行裝填層析柱的麻煩和柱效不高的風險，介質和層析柱的充分結合使層析變得高效簡單。親和層析：利用蛋白及其配體的可逆性定點結合，通過選擇性吸附，目的蛋白從復雜組分中洗脫出來。是＊常用的生物物質分離方法之一，具有特異性高，速度快，操作簡便的特點。常用的親和層析方式為金屬螯合親和層析，如NI2+ 親和柱，NI2+柱中的NI2+介質可以與有His標簽的堿性蛋白特異性結合。永聯生物為客戶的Ni2+螯合層析填料，Ni NTA Unionrose 6FF（Fast Flow）、Ni TED Unionrose 6FF（Fast Flow），同時也為客戶提供了其對應的預裝柱（Ni NTA 6FF，Ni TED 6FF），供客戶選擇。另外，由于蛋白質的特殊性，其活性受到溫度影響較大，永聯生物為客戶提供的層析柜，溫度穩定，可將蛋白純化儀置于其中進行工作避免純化工作中蛋白質因溫度條件導致的降解。 自我保護擁有強力除濕功能保護機器不受損傷結構合理總高度不超過2米柜內＊高處1.55米，便于操作至此，純化后的蛋白質即為我們的目的蛋白，后續客戶可根據需要進行結晶，或相關蛋白質性質驗證實驗等工作。為了保證每一次實驗的穩定性，很多用戶選擇一次純化出較大量蛋白質進行凍存。而保存及取用時，保持相對的溫度穩定，也是保護客戶辛苦得到的成果的重要一步?？啥ㄖ频膬龃姘?，可以在液氮和-80℃中保護樣品，也在取用時相對時間內保護樣品。隨著，對蛋白質的研究不斷深入，越來越多的厭氧型蛋白質進入科研者的視野。很多科研工作者投身于此科研項目中，但是，其研究所需要的環境條件十分嚴苛，這也是相關科研工作者頭痛的問題。為了能夠很好的解決這個問題，永聯生物深入研發針對于厭氧型蛋白質研究的厭氧蛋白純化系統。結語 隨著中國生物科研不斷的發展，隨著蛋白質研究不斷深入，永聯生物也在緊跟形勢，努力研發出更多更有特色的科研裝備，為中國科研的發展做出自己的貢獻。
